Sada CHO HCP ELISA
V tomto testu se používá jednokroková metoda imunosorbentní ELISA.Vzorky obsahující CHOK1 HCP současně reagují s HRP-značenou kozí anti-CHOK1 protilátkou a anti-CHOK1 protilátkou potaženou na destičce ELISA, čímž se nakonec vytvoří sendvičový komplex protilátka na pevné fázi-HCP-značená protilátka.Nenavázaný antigen-protilátka lze odstranit promytím destičky ELISA.Pro dostatečnou reakci se do jamky přidá substrát TMB.Vyvíjení barvy se zastaví po přidání zastavovacího roztoku a odečte se OD nebo hodnota absorbance reakčního roztoku při 450/650 nm pomocí čtečky mikrodestiček.Hodnota OD nebo hodnota absorbance je úměrná obsahu HCP v roztoku.Z toho lze podle standardní křivky vypočítat koncentraci HCP v roztoku.
aplikace
Tato souprava se používá ke kvantitativní detekci obsahu zbytků proteinu hostitelské buňky CHOK1 ve vzorcích.
Csoučásti
| S/N | Komponent | Koncentrace | Podmínky skladování |
| 1 | CHOK1 HCP standard | 0,5 mg/ml | ≤–20 ℃ |
| 2 | Anti-CHO HCP-HRP | 0,5 mg/ml | ≤–20℃, chraňte před světlem |
| 3 | TMB | NA | 2-8℃, chraňte před světlem |
| 4 | 20 × PBST 0,05 % | NA | 2-8 ℃ |
| 5 | Zastavte řešení | NA | RT |
| 6 | Těsnění mikrodestiček | NA | RT |
| 7 | BSA | NA | 2-8 ℃ |
| 8 | Přednátěrové desky s vysokou adsorpcí | NA | 2-8 ℃ |
Vyžaduje vybavení
| Spotřební materiál / vybavení | Výroba | Katalog |
| Čtečka mikrodestiček | Molekulární zařízení | Spectra Max M5, M5e nebo ekvivalent |
| Thermomixer | Eppendorf | Eppendorf/5355 nebo ekvivalentní |
| Vortexový mixér | IKA | MS3 Digital nebo ekvivalent |
Skladování a stabilita
1.Transportujte při -25~-15°C.
2.Podmínky skladování jsou uvedeny v tabulce 1;komponenty 1-2 jsou skladovány ≤–20°C,5-6 jsou skladovány RT,3、4, 7, 8 jsou skladovány při 2-8 °C;doba platnosti je 12 měsíců.
Parametry produktu
1.Citlivost: 1 ng/ml
2.Detekční rozsah: 3-100 ng/ml
3.Přesnost: CV≤ 10 % v rámci testu, CV≤ 15 % mezi testy
4.Pokrytí HCP: >80 %
5.Specifičnost: Tato souprava je univerzální, protože specificky reaguje s CHOK1 HCP nezávisle na procesu čištění.
Příprava činidla
1.PBST 0,05 %
Vezměte 15 ml 20xPBST 0,05%, zředěného v ddH2O a doplní se na 300 ml.
2.1,0 % BSA
Odeberte 1 g BSA z lahvičky a nařeďte ve 100 ml PBST 0,05 %, dobře promíchejte, dokud se úplně nerozpustí, a skladujte při 2-8 °C.Připravený ředicí pufr je platný 7 dní.Doporučuje se připravit podle potřeby.
3.Detekční roztok 2μg/ml
Vezměte 48 μl 0,5 mg/ml Anti-CHO HCP-HRP a nařeďte v 11 952 μl 1% BSA, abyste získali konečnou koncentraci detekčního roztoku 2 μg/ml.
4.Kontrola kvality a příprava standardů CHOK1 HCP
| Trubka Ne. | Originál | Koncentrace | Hlasitost | 1 % BSA | celkový objem | Finále |
| A | Standard | 0,5 mg/ml | 10 | 490 | 500 | 10 000 |
| B | A | 10 000 | 50 | 450 | 500 | 1 000 |
| S1 | B | 1 000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
| S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
| S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
| S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
| S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
| S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
| NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
Tabulka: Příprava QC a standardů
Postup testu
1.Připravte reagencie, jak je uvedeno v části „Příprava činidel“ výše.
2.Do každé jamky odeberte 50 μl standardů, vzorků a QC (viz tabulka 3), poté přidejte 100 μl detekčního roztoku (2 μg/ml);Zakryjte destičku pečetí a umístěte destičku ELISA na termomixér.Inkubujte při 500 ot./min., 25±3 °C po dobu 2 hodin.
3.Obraťte mikrodestičku v dřezu a zlikvidujte potahovací roztok.Napipetujte 300 μl PBST 0,05 % do každé jamky, aby se destička ELISA promyla a roztok se zlikvidoval, a promytí opakujte 3krát.Talíř překlopte na čistou papírovou utěrku a osušte.
4.Přidejte 100 μl TMB substrátu (viz tabulka 1) do každé jamky, utěsněte destičku ELISA a inkubujte ve tmě při 25±3 °C po dobu 15 minut.
5.Do každé jamky napipetujte 100 μl zastavovacího roztoku.
6.Změřte absorbanci při vlnové délce 450/650 nm čtečkou mikrodestiček.
7.Analyzujte data pomocí SoftMax nebo ekvivalentního softwaru.Vyneste standardní křivku pomocí čtyřparametrového logistického regresního modelu.
Příklad standardní křivky
POZNÁMKA: Pokud koncentrace HCP ve vzorku překročí horní limit standardní křivky, je třeba jej před testováním řádně naředit ředícím pufrem.
POZNÁMKY
Stop roztokem je 2M kyselina sírová, zacházejte s ní opatrně, aby nedošlo k rozstříknutí!
