DNáza I
DNáza I (deoxyribonukleáza I) je endodeoxyribonukleáza, která může štěpit jednovláknovou nebo dvouvláknovou DNA.Rozpoznává a štěpí fosfodiesterové vazby za vzniku monodeoxynukleotidů nebo jednořetězcových nebo dvouřetězcových oligodeoxynukleotidů s fosfátovými skupinami na 5'-konci a hydroxylem na 3'-konci.Aktivita DNázy I závisí na Ca2+ a může být aktivována ionty dvojmocných kovů, jako je Mn2+ a Zn2+.5mM Ca2+ chrání enzym před hydrolýzou.V přítomnosti Mg2+ mohl enzym náhodně rozpoznat a štěpit jakékoli místo na jakémkoli řetězci DNA.V přítomnosti Mn2+ mohou být dvojřetězce DNA současně rozpoznány a štěpeny na téměř stejném místě za vzniku fragmentů DNA s plochým koncem nebo fragmentů DNA s lepivým koncem s vyčnívajícími 1-2 nukleotidy.
Vlastnost produktu
Bovinní pankreatická DNáza I byla exprimována v kvasinkovém expresním systému a purifikována.
Csoučásti
| Komponent | Hlasitost | |||
| 0,1 KU | 1KU | 5KU | 50 KU | |
| DNáza I, bez RNázy | 20 μl | 200 μl | 1 ml | 10 ml |
| 10× DNase I Buffer | 1 ml | 1 ml | 5× 1 ml | 5× 10 ml |
Doprava a skladování
1. Stabilita při skladování: – 15℃~-25℃ pro skladování;
2. Stabilita přepravy: Přeprava pod ledovými obaly;
3. Dodáváno v: 10 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl2, 50% glycerol, pH 7,6 při 25 °C.
Definice jednotky
Jedna jednotka je definována jako množství enzymu, které zcela degraduje 1 ug DNA pBR322 za 10 minut při 37 °C.
Kontrola kvality
RNáza:5 U DNázy I s 1,6 μg MS2 RNA po dobu 4 hodin při 37 °C nevede k žádné degradaci, jak bylo stanoveno elektroforézou na agarózovém gelu.
Bakteriální endotoxin:LAL-test, podle Chinese Pharmacopoeia IV 2020 edition, gelová limitní testovací metoda, obecné pravidlo (1143).Obsah bakteriálního endotoxinu by měl být ≤ 10 EU/mg.
Návod k použití
1.Připravte reakční roztok ve zkumavce bez RNázy podle níže uvedených poměrů:
| Komponent | Hlasitost |
| RNA | X μg |
| 10 × DNase I Buffer | 1 μl |
| DNáza I, bez RNázy (5U/μL) | 1 U na μg RNA |
| ddH2O | Až 10 μl |
2,37 ℃ po dobu 15 minut;
3. Přidejte terminační pufr pro zastavení reakce a zahřívejte na 65 °C po dobu 10 minut, aby se inaktivovala DNáza I. Vzorek lze přímo použít pro další transkripční experiment.
Poznámky
1.Použijte 1U DNázy I na μg RNA nebo 1U DNázy I pro méně než 1μg RNA.
2. EDTA by měla být přidána do konečné koncentrace 5 mM, aby se chránila RNA před degradací během inaktivace enzymu.
