Robustart Taq DNA polymeráza
Robustart Taq DNA polymeráza je DNA polymeráza s horkým startem.Tento produkt může nejen lépe inhibovat nespecifickou reakci způsobenou nespecifickým nasedáním primerů nebo agregací primerů v procesu přípravy a amplifikace systému PCR.Proto má vynikající specificitu a je účinnější pro amplifikaci templátů s nízkou koncentrací a je vhodný pro multiplexní amplifikační reakci PCR.Navíc má tento produkt velmi dobrou použitelnost a stabilní výsledky amplifikace lze získat v různých typech PCR reakcí.
Komponenty
1.5 U/μL Robustart Taq DNA polymerázy
2.10 × PCR Buffer II (bez Mg²+) (volitelné)
3.25 mM MgCl2(volitelný)
* 10 × PCR Buffer II (bez Mg²+) neobsahuje dNTP a Mg²+, přidejte dNTP a MgCl2při přípravě reakčního systému.
Doporučené aplikace
1.Rychlé zesílení.
2.Vícenásobné zesílení.
3.Přímá amplifikace krve, výtěrů a dalších vzorků.
4.Detekce respiračních onemocnění.
Skladovací stav
-20°C pro dlouhodobé skladování, před použitím je třeba dobře promíchat, vyhnout se častému zmrazování a rozmrazování.
*Pokud po zchlazení dojde ke srážení, je to normální;Před smícháním a použitím se doporučuje vytemperovat na pokojovou teplotu.
Definice jednotky
Jedna aktivní jednotka (U) je definována jako množství enzymu, které inkorporuje 10 nmol deoxyribonukleotidu do materiálu nerozpustného v kyselině při 74 °C po dobu 30 minut s použitím aktivované DNA spermatu lososa jako templátu/primeru.
Kontrola kvality
1.Elektroforetická čistota SDS-PAGE vyšší než 98 %.
2.Citlivost zesílení, kontrola mezi dávkami, stabilita.
3.Žádná exogenní nukleázová aktivita, žádná exogenní endonukleáza nebo kontaminace exonukleázou
Instrukce
Nastavení reakce
| Komponenty | Hlasitost (μL) | Závěrečné soustředění |
| 10 × PCR Buffer II (bez Mg²+)a | 5 | 1× |
| dNTP (10 mM každý dNTP) | 1 | 200 uM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 | 1-4 mM |
| Robustart Taq DNA polymeráza (5U/μL) | 0,25-0,5 | 1,25-2,5 U |
| 25 × Základní směsb | 2 | 1× |
| Šablona | - | ＜ 1 μg/reakci |
| ddH2O | Do 50 | - |
Poznámky:
1) a.Pufr neobsahuje dNTP a Mg²+, přidejte dNTP a MgCl2při přípravě reakčního systému.
2) b.Pokud se používá pro qPCR/qRT-PCR, měly by být do reakčního systému přidány fluorescenční sondy.Obvykle poskytne dobré výsledky konečná koncentrace primeru 0,2 μM;pokud je reakční výkon špatný, lze koncentraci primeru upravit v rozsahu 0,2-1 μM.Koncentrace sondy je obvykle optimalizována v rozmezí 0,1-0,3 μM.K nalezení nejlepší kombinace primeru a sondy lze provést experimenty s koncentračním gradientem.
Protokol tepelného cyklování
| Pravidelná PCRproces | |||
| Krok | Teplota | Čas | Cykly |
| Předdenaturace | 95℃ | 1-5 min | 1 |
| Denaturace | 95℃ | 10-20 sec | 40-50 |
| Žíhání / prodloužení | 56-64 ℃ | 20-60 sec | |
| Rychlá PCRproces | |||
| Krok | Teplota | Čas | Cykly |
| Předdenaturace | 95℃ | 30 sec | 1 |
| Denaturace | 95℃ | 1-5 sec | 40-45 |
| Žíhání / prodloužení | 56-64 ℃ | 5-20 sec | |
Poznámky
1.Rychlost amplifikace rychlé DNA polymerázy by neměla být menší než 1 kb/10 s.Rychlost nárůstu a poklesu teploty, režim řízení teploty a účinnost vedení tepla se u různých přístrojů PCR velmi liší, proto se doporučuje optimalizovat optimální reakční podmínky pro konkrétní přístroj pro rychlou PCR.
2.Systém je vysoce adaptabilní, s vyšší specificitou a citlivostí.
3.Vhodné pro použití jako vysoce citlivá PCR detekční činidla a mohou být použity v multiplexních amplifikačních reakcích PCR.
4.5′→3′ polymerázová aktivita, 5′→3′ exonukleázová aktivita;žádná 3′→5′ exonukleázová aktivita;žádná funkce korektury.
5.Vhodné pro kvalitativní a kvantitativní testování PCR a RT-PCR.
6.3′ konec produktu PCR je A, který může být přímo klonován do T vektoru.
7.Třístupňová metoda se doporučuje pro primery s nízkými teplotami nasedání nebo pro amplifikaci fragmentů delších než 200 bp.
