Ultra Nukleáza
UltraNuclease je geneticky upravená endonuklaáza odvozená od Serratia marcescens, která je schopna degradovat DNA nebo RNA, buď dvouvláknovou nebo jednovláknovou, lineární nebo kruhovou za širokého rozsahu podmínek, zcela degradovat nukleové kyseliny na 5'-monofosfátové oligonukleotidy s délkou 3-5 bází. .Po modifikaci genetického inženýrství byl produkt fermentován, exprimován a purifikován v Escherichia coli (E. coli), což snižuje viskozitu buněčného supernatantu a buněčného lyzátu při vědeckém výzkumu, ale také zlepšuje účinnost čištění a funkční výzkum proteinu.Může být také použit v genové terapii, purifikaci virů, výrobě vakcín, proteinovém a polysacharidovém farmaceutickém průmyslu jako činidlo pro odstranění hostitelských zbytků nukleové kyseliny.
Vlastnosti produktu
| Č. CAS | 9025-65-4 |
| Číslo ES | |
| Molekulární váha | 30 kDa |
| Izoelektrický bod | 6,85 |
| Čistota bílkovin | ≥99 % (SDS-PAGE a SEC-HPLC) |
| Konkrétní činnost | ≥1.1×106U/mg |
| OptimumTemperature | 37 °C |
| Optimální pH | 8,0 |
| Proteázová aktivita | negativní |
| Biozátěž | ＜10 CFU/100 000 U |
| Reziduální protein hostitelské buňky | ≤ 10 ppm |
| Těžký kov | ≤ 10 ppm |
| Bakteriální endotoxin | ＜0,25EU/1000U |
| Vyrovnávací paměť úložiště | 20 mM Tris-HCl, pH 8,0, 2 mM MgCl2, 20 mM NaCl, 50% glycerol |
Podmínky skladování
≤0°C přeprava；-25~-15°C Skladování，2 roky platnosti (vyvarujte se zmrazování a rozmrazování).
Definice jednotky
Množství enzymu použitého ke změně hodnoty absorpce △A260 o 1,0 během 30 minut při 37 °C, pH 8,0, ekvivalentní 37 μg štěpené DNA lososího spermatu štěpením na oligonukleotidy, bylo definováno jako aktivní jednotka (U).
Kontrola kvality
Reziduální protein hostitelské buňky: souprava ELISA
•Proteáza Zbytky: 250 KU/ml UltraNuclease reagovala se substrátem po dobu 60 minut, nebyla detekována žádná aktivita.
•Bakteriální endotoxin: LAL-Test, Lékopis Čínské lidové republiky svazek 4 (vydání 2020) gelová limitní testovací metoda.Obecná pravidla (1143).
•Biozátěž: Lékopis Čínské lidové republiky svazek 4 (vydání z roku 2020)— Obecné
Pravidla pro test sterility (1101), Národní standard ČLR, GB 4789.2-2016.
•Těžký kov:ICP-AES, HJ776-2015.
Úkon
Aktivita ultranukleázy byla významně inhibována, když koncentrace SDS byla vyšší než 0,1 % nebo EDTA
koncentrace byla vyšší než 1 mM. Surfaktant Triton X-100, Tween 20 a Tween 80 neměl žádný vliv na nukleázu
vlastnosti, když koncentrace byla pod 1,5 %.
| Úkon | Optimální provoz | Platná operace |
| Teplota | 37℃ | 0-45 ℃ |
| pH | 8,0-9,2 | 6,0-11,0 |
| Mg2+ | 1-2 mM | 1-15 mM |
| DTT | 0-100 mM | >100 mM |
| 2-merkaptoethanol | 0-100 mM | >100 mM |
| Monovalentní kovový iont (Na+, K+ atd.) | 0-20 mM | 0-200 mM |
| PO43- | 0-10 mM | 0-100 mM |
Použití a dávkování
• Odstraňte exogenní nukleovou kyselinu z vakcínových produktů, snižte riziko toxicity zbytkové nukleové kyseliny a zvyšte bezpečnost produktu.
• Snížit viskozitu krmné kapaliny způsobenou nukleovou kyselinou, zkrátit dobu zpracování a zvýšit výtěžek bílkovin.
• Odstraňte nukleovou kyselinu, která obalila částici (virus, inkluzní tělísko atd.), což je vhodné
k uvolnění a čištění částice.
| Experimentální typ | Produkce bílkovin | Virus, vakcína | Cell Drugs |
| Počet buněk | 1 g vlhké hmotnosti buňky (resuspendováno s 10 ml pufru) | 1L fermentace tekutý supernatant | 1L kultury |
| Minimální dávkování | 250U | 100U | 100U |
| Doporučené dávkování | 2500U | 25 000 U | 5000U |
• Úprava nukleázou může zlepšit rozlišení a výtěžnost vzorku pro sloupcovou chromatografii, elektroforézu a blotovací analýzu.
• V genové terapii je nukleová kyselina odstraněna, aby se získaly purifikované adeno-asociované viry.
