UDG/UNG enzymy
UDG (uracil DNA glykosyláza) může katalyzovat hydrolýzu N-glykosidické vazby mezi uracilovou bází a cukr-fosfátovou kostrou v ssDNA a dsDNA.Dokáže snadno kontrolovat znečištění aerosolem a je vhodný pro běžné systémy molekulární biologie, jako je PCR, qPCR, RT-qPCR a LAMP.
Specifikace
| Hostitel výrazu | Rekombinantní E. coli s uracilovým DNA glykosylázovým genem |
| Molekulární váha | 24. 8 kDa |
| Čistota | ≥95 % (SDS-PAGE) |
| Tepelná inaktivace | 95℃, 5~10 min |
| Definice jednotky | Jedna jednotka (U) je definována jako množství enzymu, které je potřeba ke katalýze hydrolýzy 1 μg dsDNA obsahující dU za 30 minut při 25 °C. |
Úložný prostor
Výrobek by měl být skladován při teplotě -25°C~-15°C po dobu dvou let.
Instrukce
1.Příprava reakční směsi pro PCR podle následujícího systému
| Komponenty | Objem (μL) | Závěrečné soustředění |
| 10×PCR Buffer (Mg²+Plus) | 5 | 1× |
| 25 mmol/LMgCl | 3 | 1,5 mmol/l |
| dUTP (10 mmol/l) | 3 | 0,6 mmol/l |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP (10 mmol/výluh) | 1 | 0,2 mmol/výluh |
| DNA šablony | X | - |
| Primer1 (10 μmol/l) | 2 | 0,4 μmol/l |
| Primer 2 (10 μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/l |
| Taq DNA polymeráza (5 U/μL) | 0,5 | 0,05 U/μL |
| Uracilová DNA glykosyláza (UDG/UNG), 1 U/μL | 1 | 1 U/μL |
| ddH20 | Až 50 | - |
Poznámka: Podle experimentálních požadavků lze konečnou koncentraci dUTP upravit mezi 0,2-0,6 mmol/l a 0,2 mmol/l dTTP lze přidat selektivně.
2.Postup amplifikace
| Krok cyklu | Teplota | Čas | Cykly |
| degradace templátu obsahujícího dU | 25℃ | 10 minut | 1 |
| Aktivace UDG, počáteční denaturace templátu | 95℃ | 5~10 minut | 1 |
| Denaturace | 95℃ | 10 sec |
30-35 |
| Žíhání | 60℃ | 20 sec | |
| Rozšíření | 72 ℃ | 30 s/kb | |
| Konečné prodloužení | 72 ℃ | 5 minut | 1 |
Poznámka: Reakční doba při 25 °C může být upravena během 5-10 minut podle experimentálních požadavků.
Poznámky
1.UDG je aktivní ve většině reakčních pufrů PCR.
2.Enzymy by měly být při použití skladovány v lednici nebo na ledové lázni a měly by být skladovány při -20 °C ihned po použití.
3.Noste prosím nezbytné OOP, jako je laboratorní plášť a rukavice, abyste zajistili své zdraví a bezpečnost!
