BspQI
BspQI může být rekombinantně exprimován v E. coli, které mohou rozpoznat specifická místa a jsou produkovány pod
BspQI, IIs restrikční endonukleáza restrikční endonukleáza, je odvozena z rekombinantního kmene E. coli, který nese klonovaný a modifikovaný gen BspQI z Bacillus sphaericus.Dokáže rozpoznat specifická místa a rozpoznávací sekvence a místa štěpení jsou následující:
5' · · · ·GCTCTTC(N) · · · · · · · · · · 3'
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
Vlastnosti produktu
1. Vysoká aktivita, Rychlé trávení;
2. Nízká aktivita hvězd, zajišťující přesné řezání jako „skalpel“;
3. Bez BSA a bez živočišného původu;
Citlivost na methylaci
Djsem methylace:Není citlivý;
Dcm methylace:Není citlivý;
Methylace CpG:Není citlivý;
Podmínky skladování
Výrobek by měl být odeslán při teplotě ≤ 0℃;Skladujte při teplotě -25~-15℃.
Vyrovnávací paměť úložiště
20 mM Tris-HCl, 0,1 mM EDTA, 500 mM KCI, 1,0 mM dithiothreitol, 500 ug/ml rekombinantního albuminu, 0,1 % Trition X-100 a 50 % glycerol (pH 7,0 při 25 °C).
Definice jednotky
Jedna jednotka je definována jako množství enzymu potřebného k štěpení 1 ug DNA vnitřní kontroly za 1 hodinu při 50 °C v celkovém reakčním objemu 50 ul.
Kontrola kvality
Test proteinové čistoty (SDS-PAGE):Čistota BspQI byla >95 % stanoveno analýzou SDS-PAGE.
RNáza:10 U BspQI s 1,6 μg MS2 RNA po dobu 4 hodin při 50 °C nevede k žádné degradaci, jak bylo stanoveno elektroforézou na agarózovém gelu.
Nespecifická aktivita DNázy:10 U BspQI s 1 μg λ DNA při 50 °C po dobu 16 hodin, ve srovnání s 50 °C po dobu 1 hodiny, neposkytuje žádný přebytek DNA, jak bylo stanoveno elektroforézou na agarózovém gelu.
Ligace a přeříznutí:Po štěpení 1 μg λDNA pomocí 10U BspQI mohou být fragmenty DNA ligovány pomocí T4 DNA ligázy při 16 °C.A tyto ligované fragmenty mohou být resekovány pomocí BspQI.
E-coli DNA: E. coli 16s rDNA-specifická TaqMan qPCR detekce ukázala, že zbytek genomu E. coli ≤ 0,1 pg/ul.
Hostitelský proteinový zbytek:≤ 50 ppm
Bakteriální endotoxin: LAL-test, podle Chinese Pharmacopoeia IV 2020 edition, gelová limitní testovací metoda, obecné pravidlo (1143).Obsah bakteriálního endotoxinu by měl být ≤ 10 EU/mg.
Reakční systém a podmínky
| Komponent | Hlasitost |
| BspQ I (10 U/μL) | 1 μl |
| DNA | 1 μg |
| 10 x BspQ I pufr | 5 μl |
| dd H2O | Až 50 μl |
Reakční podmínky: 50℃, 1~16 hodin.
Tepelná inaktivace: 80°C po dobu 20 min.
Doporučený reakční systém a podmínky mohou poskytnout relativně dobrý účinek enzymového trávení, což je pouze pro informaci, podrobnosti naleznete ve výsledcích experimentu.
Aplikace produktu
Štěpení restrikční endonukleázou, rychlé klonování.
Poznámky
1. Objem enzymu ≤ 1/10 reakčního objemu.
2. Aktivita hvězdy se může objevit, když je koncentrace glycerolu vyšší než 5 %.
3. K aktivitě štěpení může dojít, když je substrát pod doporučeným poměrem.
