Multiplex One Step RT-qPCR Premix-UNG
Kat. číslo: HCB5145A
Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) je multiplexní kvantitativní PCR kit založený na RNA jako templátu.V průběhu experimentu byly reverzní transkripce a kvantitativní PCR prováděny ve stejné zkumavce, což zjednodušilo experimentální operaci a snížilo riziko kontaminace.V této soupravě byl první řetězec cDNA účinně syntetizován tepelně odolnou reverzní transkriptázou a kvantitativně amplifikován HotStart Tag DNA polymerázou.Souprava obsahuje především optimalizovaný MP pufr, směs enzymů atd. Tlumivý roztok již obsahuje Mg2+a dNTP.Navíc jsou přidány faktory, které mohou účinně inhibovat nespecifickou PCR amplifikaci a zlepšit účinnost amplifikace více qPCR reakcí, což může zajistit účinnost amplifikace a provést až mnohonásobnou amplifikační reakci.Byl přidán systém dUTP/UDG, aby se účinně zabránilo riziku kontaminace aerosolem.
Komponenty
1. Vyrovnávací paměť
2. Směs enzymů
Specifikace
| Hot Start | Vestavěný horký start |
| Metoda detekce | Detekce primer-sonda |
| PCR metoda | Jednokroková RT-qPCR |
| Polymeráza | Taq DNA polymeráza |
| Typ vzorku | DNA |
Podmínky skladování
Výrobek je dodáván se suchým ledem a může být skladován při -25~-15℃ po dobu 1 roku.Mělo by se vyhnout častémuzmrazit-rozmrazit.Doporučuje se ukládat samostatně.
Instrukce
1.Reakce Systém
| Komponenty | Objem (μL) | Závěrečné soustředění |
| 2 × vyrovnávací paměť MP | 12.5 | 1× |
| Směs enzymů | 1 | - |
| Směs primer/sonda (2,5 μM) | 3 | 0,3 uM |
| Template RNA | 1-10 | - |
| H2O bez RNázy | do 25 | - |
Poznámky:
Před použitím dobře promíchejte, vyhněte se nadměrným bublinám způsobeným prudkými vibracemi.
A.Koncentrace primeru: Směs primerů včetně multiplexního primeru, v závislosti na situaci může být optimální koncentrace primeru mezi 0,l a 1,0μM.
b.Koncentrace sondy: Směs sond včetně multiplexní sondy značení rozdíl fluorescenční skupiny, v závislosti na situaci optimální koncentrace sondy může být mezi 0,05 a 0,5 μM.
C.Ředění šablony: qPCR je vysoce citlivá a doporučuje se šablonu naředit.Kontrolní hodnota Ct je vhodná mezi 20 a 35.
d.Příprava systému: Připravte na ultra čistém pracovním stole a pipetovací a reakční zkumavce bez zbytků nukleázy;doporučuje se používat hlavu pistole s filtrační vložkou.Zabraňte křížové kontaminaci a kontaminaci aerosolem.
2. Optimalizovaná jízda na koleProtokol
| Cyklus krok | Temp. | Čas | Cykly |
| Reverzní transkripce | 50℃A | 20 minut | 1 |
| Počáteční denaturace | 95℃ | 5 minut | 1 |
| Amplifikační reakce | 95℃ | 15 sekund |
40-45 |
| 60℃ b | 30 sekund c |
Poznámky:
A.Reverzní přepis: Teplotu lze zvolit 42°C nebo 50°C.
b.Amplifikační reakce: Teplota je upravena podle hodnoty Tm navržených primerů.
C.Získávání fluorescenčního signálu: Nastavte prosím experimentální postup podle požadavků návodu k přístroji.
Poznámky
Používejte prosím nezbytné OOP, jako je laboratorní plášť a rukavice, abyste zajistili své zdraví a bezpečnost.
