Multiplexní qPCR Probe Premix
Kat. číslo: HCB5051A
TaqMan multiplexní qPCR Master Mix (Dye Based) je předřešení pro 2× kvantitativní PCR amplifikaci v reálném čase vyznačující se vysokou citlivostí a specificitou, která má modrou barvu a má efekt přidání vzorku.Tento produkt je 2× Mix předem namíchané činidlo, které umožňuje až čtyři fluorescenční kvantitativní PCR reakce v jedné reakční jamce.Tento produkt obsahuje metodu geneticky modifikovaných protilátek pro horký start enzymu Taq, což výrazně zlepšuje amplifikační citlivost a specificitu.Současně tento produkt hluboce optimalizoval multi-reakční pufr, který může zlepšit účinnost amplifikace reakce a podporovat efektivní amplifikaci templátů s nízkou koncentrací.Tento produkt lze použít pro genotypizaci a multiplexní kvantitativní analýzu.
Specifikace
| Hot Start | Vestavěný horký start |
| Metoda detekce | Detekce primer-sonda |
| PCR metoda | qPCR |
| Polymeráza | Taq DNA polymeráza |
| Typ vzorku | DNA |
Podmínky skladování
Výrobek je dodáván se suchým ledem a může být skladován při -25~-15℃ po dobu 2 let.
Instrukce
1. ReakceSystém
| Komponenty | Objem (μL) | Závěrečné soustředění |
| 2× TaqMan multiplex qPCR Master Mix | 12.5 | 1× |
| Základní směs (10 μmol/L) a | × | 0,1 - 0,5 μmol/L |
| Směs sondy (10 μmol/L)b | × | 50 - 250 nmol/l |
| Referenční barvivo Rox | 0,5 | 1× |
| Šablona DNA/cDNA | 1-10 | - |
| ddH2O | až 25 | - |
Poznámky:Před použitím důkladně promíchejte, aby se předešlo nadměrným bublinám při intenzivním protřepávání.
A.Koncentrace primeru: Primer Mix obsahuje několik párů primerů, obvykle každý primer s konečnou koncentrací 0,2 μmol/l a může být podle potřeby také upraven mezi 0,1 a 0,5 μmol/l.
b.Koncentrace sondy: Probe Mix obsahuje více sond s různými fluorescenčními signály a koncentraci každé sondy lze upravit mezi 50 a 250 nmol/L podle konkrétní situace.
1.Reference barviva Rox: Používá se na amplifikačním přístroji Real Time PCR, jako je Applied Biosystems, ke korekci chyby fluorescenčního signálu generovaného mezi jamkami;tento produkt neobsahuje referenční barvivo Rox.V případě potřeby se doporučuje Cas#10200.
2.Ředění šablony: qPCR je vysoce citlivá a pro použití se doporučuje šablonu naředit.Pokud je templátem zásobní roztok cDNA, objem templátu by neměl překročit 1/10 celkového objemu.
3.Reakční systém: Pro zajištění účinnosti a opakovatelnosti amplifikace cílového genu se doporučuje 25 μL, 30 μL nebo 50 μL.
4.Příprava systému: Připravte se na super čistém stole a použijte špičky a reakční zkumavky bez zbytků nukleázy;doporučuje se používat hroty s filtračními patronami.Zabraňte křížové kontaminaci a kontaminaci aerosolem.
2.Program reakce
| Krok cyklu | Temp. | Čas | Cykly |
| Počáteční denaturace | 95 ℃ | 5 minut | 1 |
| Denaturace | 95 ℃ | 15 sekund | 45 |
| Žíhání/prodlužování | 60 ℃ | 30 sekund |
Poznámky:
1.Žíhání/prodlužování: Teplotu a čas lze vhodně upravit podle navržené hodnoty Tm primeru.
2.Získání fluorescenčního signálu: Doba získání fluorescenčního signálu požadovaná pro různé detekční přístroje qPCR je různá, nastavte prosím podle minimálního časového limitu.Čas několika běžných nástrojů je nastaven takto:
20 sekund: Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast
31 sekund: Applied Biosystems 7300
32 sekund: Applied Biosystems 7500
Poznámky
Noste prosím nezbytné OOP, jako je laboratorní plášť a rukavice, abyste zajistili své zdraví a bezpečnost!
