Inhibitor RNázy (bez glycerolu)
Inhibitor myší RNázy je rekombinantní inhibitor myší RNázy exprimovaný a purifikovaný z E. coli.Nekovalentní vazbou se váže na RNázu A, B nebo C v poměru 1:1, čímž inhibuje aktivitu tří enzymů a chrání RNA před degradací.Není však účinný proti RNáze 1, RNáze T1, S1 nukleáze, RNáze H nebo RNáze z Aspergillus.Myší inhibitor RNázy byl testován pomocí RT-PCR, RT-qPCR a IVT mRNA a byl kompatibilní s různými komerčními reverzními transkriptázami, DNA polymerázami a RNA polymerázami.
Ve srovnání s lidskými inhibitory RNázy neobsahuje myší inhibitor RNázy dva cysteiny, které jsou vysoce citlivé na oxidaci, která způsobuje inaktivaci inhibitoru.Díky tomu je stabilní při nízkých koncentracích DTT (méně než 1 mM).Díky této vlastnosti je vhodný pro použití v reakcích, kde jsou vysoké koncentrace DTT nepříznivé pro reakci (např. RT-PCR v reálném čase).
Aaplikace
Tento produkt může být široce používán v jakémkoli experimentu, kde je možná interference RNázy, aby se zabránilo degradaci RNA, jako například:
1. Syntéza prvního vlákna cDNA, RT-PCR, RT-qPCR atd.;
2. Chránit RNA před degradací při transkripci/translaci in vitro (např. replikace viru in vitro);
3. Inhibice aktivity RNázy během izolace a purifikace RNA.
Podmínky skladování
Skladujte při -25～-15℃;
Cykly zmrazování a rozmrazování ≤ 5krát;
Platnost 1 rok.
Definice jednotky
Jedna jednotka je definována jako množství inhibitoru RNázy potřebné k inhibici aktivity 5 ng RNázy A o 50 %.
Molekulární váha
Inhibitor RNázy (bez glycerolu) je protein o hmotnosti 50 kDa.
Kontrola kvality
Exonukleáza Aktivita:
Inkubace 40 U enzymu s 1 ug λ-Hind III štěpené DNA po dobu 16 hodin při 37 °C nevedla k žádné detekovatelné degradaci DNA, jak bylo stanoveno gelovou elektroforézou.
Endonukleázová aktivita:
Inkubace 40 U enzymu s 1 ug λ DNA po dobu 16 hodin při 37 °C nevedla k žádné detekovatelné degradaci DNA, jak bylo stanoveno gelovou elektroforézou.
Nicking Aktivita:
Inkubace 40 U enzymu s 1 ug pBR322 po dobu 16 hodin při 37 °C nevedla k žádné detekovatelné degradaci DNA, jak bylo stanoveno gelovou elektroforézou.
RNáza Aktivita:
Inkubace 40 U enzymu s 1,6 μg MS2 RNA po dobu 4 hodin při 37 °C nevedla k žádné detekovatelné degradaci RNA, jak bylo stanoveno gelovou elektroforézou.
E.coli DNA:
TaqMan qPCR detekuje 40 U enzymu.DNA E. coli je ≤ 0,1 pg/40 U.
Npoznámkas
1. Netřeste ani nemíchejte prudce, aby nedošlo k inaktivaci enzymů.
2. Inhibitor RNázy je aktivní při teplotách v rozmezí od 25℃ do 55℃ a je inaktivován při ≥65℃.
3. Aktivita RNázy H, RNázy 1 a RNázy T1 není inhibována.
4. Rozsah pH pro inhibici aktivity RNázy je široký (aktivní při pH 5-9), maximální aktivitu vykazuje při pH 7-8.
