One Step RT-qPCR SYBR Green Premix
Kat. číslo: HCB5140A
One Step RT-qPCR Syber Green Premix je pro kvantifikaci fluorescence na základě barviva SYBR Green I.Pomocí genově specifických primerů jsou reverzní transkripce a reakce qPCR dokončeny v jedné zkumavce, což eliminuje potřebu opakovaného otevírání uzávěru a pipetování, což výrazně zlepšuje účinnost testu a snižuje riziko kontaminace.Pro vzorky RNA souprava využívá tepelně odolnou reverzní transkriptázu pro účinnou syntézu cDNA a HotStart Taq DNA polymerázu pro kvantitativní amplifikaci.V optimalizovaném systému pufrů může být citlivost soupravy až 0,1 pg pro vysoce exprimované cíle a až 1 pg pro středně exprimované cíle.Kit je vhodný pro amplifikaci a kvantifikaci vzorků DNA.Umožňuje citlivou detekci a kvantifikaci nukleových kyselin z různých rostlinných a živočišných vzorků, buněk a mikroorganismů.
Komponenty
| No | název | Hlasitost | Hlasitost |
| 1 | Advanced Buffer | 250 μl | 2×1,25 ml |
| 2 | Advanced Enzyme Mix | 20 μl | 200 μl |
| 3 | Bez RNázy H2O | 250 μl | 2×1,25 ml |
Podmínky skladování
Tento produkt by měl být skladován při teplotě -25~-15℃ mimo světlo po dobu 1 roku.
Instrukce
1. Konfigurace reakčního systémud
| Komponenty | Objem (μL) | Objem (μL) | Závěrečné soustředění |
| Advanced Buffer | 12.5 | 25 | 1× |
| Advanced Enzyme Mix | 1 | 2 | - |
| Forward Primer (10 μmol/L)a | 0,5 | 1 | 0,2 μmol/l |
| Reverzní primer (10 μmol/L)a | 0,5 | 1 | 0,2 μmol/l |
| RNA Tamplateb | X | X | - |
| Bez RNázy H2Óc | do 25 | do 50 | - |
Poznámky:
1) a.TKonečná koncentrace primeru byla 0,2 μmol/l, která mohla být podle potřeby také upravena mezi 0,1 a 1 μmol/l.
2) b.Reagencie je extrémně citlivá, s celkovou RNA v rozmezí 1 pg-1 μg a testování lidských vzorků ukázalo optimální vstup 1 pg-100 ng, podle potřeby kontrolující celkovou hodnotu Ct v rozmezí 15-30.
3) c.Pro zajištění platnosti a reprodukovatelnosti amplifikace cílového genu se doporučuje použít 20 μL nebo 50 μL.
4) d.Připravte se na ultračisté lavici a použijte špičky a reakční zkumavky bez nukleázových zbytků;doporučujeme hroty s filtračními vložkami.Zabraňte křížové kontaminaci a kontaminaci aerosolem.
2.Program reakce
| Krok cyklu | Temp. | Čas | Cykly |
| Reverzní transkripce | 50℃a | 6 minut | 1 |
| Počáteční denaturace | 95℃ | 5 minut | 1 |
| Amplifikační reakce | 95℃ | 15 sec | 40 |
| 60℃b | 30 sec | ||
| Fáze křivky tání | Výchozí nastavení přístroje | 1 | |
Poznámky:
1) a.Teplotu reverzní transkripce lze zvolit mezi 50-55°C podle experimentálních potřeb.U vzorků DNA lze proces reverzní transkripce vynechat.
2) b.Ve speciálních případech lze teplotu žíhání/prodlužování upravit podle hodnoty Tm primeru, doporučuje se 60°C.
Poznámky
1. Tento produkt je určen pouze pro výzkumné účely.
2. Pro vaši bezpečnost používejte laboratorní pláště a jednorázové rukavice.
