RT-LAMP Colormetric Master Mix HCB5204A
Tento produkt obsahuje reakční pufr, RT-Enzymes Mix (Bst DNA polymeráza a tepelně odolná reverzní transkriptáza), lyofilizované ochranné látky a chromogenní složky barviv.Pro použití stačí použít pufr, reakční enzym a primer se smíchají a přidají k templátu;přidání lyofilizovaného ochranného prostředku může být přímé.Byl připojen k lyofilizátoru a lyofilizován a při použití byly přidány pouze primery a templáty.Tato souprava poskytuje rychlou a jasnou vizuální detekci amplifikace, přičemž negativní reakce je označena červeně a pozitivní reakce je indikována změnou barvy na žlutou.
Komponent
| Komponent | HCB5204A-01 | HCB5204A-02 | HCB5204A-03 |
| Amplifikační pufr zprostředkovaný smyčkou (s barvivem) | 0,96 ml | 4,80 ml × 2 | 9,60 ml × 10 |
| Směs RT-enzymů | 270 μl | 2,70 ml | 2,70 ml × 10 |
| Lyofilizovaný ochranný prostředek | 0,96 ml x 2 | 9,60 ml × 2 | 9,60 ml × 20 |
Aplikace
Pro izotermickou amplifikaci DNA nebo RNA.
Podmínky skladování
Přepravováno se suchým ledem, skladováno při -25~ -15℃.Vyhněte se častému zmrazování-rozmrazování, produkt má platnost 12 měsíců.
Protokol
1.Rozmrazte reakční pufr, který chcete použít, při teplotě místnosti.Krátce vortexujte nebo zkumavky několikrát převraťte, aby se důkladně promíchaly, a poté odstřeďte, aby se kapalina shromáždila na dně zkumavky.
2.Příprava reakčního systému.Toto činidlo lze připravit ve dvou reakčních systémech, kapalné reakční směsi a lyofilizované směsi systému.
1) Připravte kapalnou reakční směs
| Komponent | Hlasitost |
| Amplifikační pufr zprostředkovaný smyčkou (s barvivem) | 10 μL |
| Směs RT-enzymů | 2,8 μl |
| 10 × základní směsa | 5 μl |
| Šablony DNA/RNA b | × μL |
| Voda bez nukleázy | Až 50 μl |
2) Směs lyofilizačního systému
① Připravte lyofilizovanou směs
| Komponent | Hlasitost |
| Amplifikační pufr zprostředkovaný smyčkou (s barvivem) | 10 μL |
| Lyofilizovaný ochranný prostředek | 20 μl |
| Směs RT-enzymů | 2,8 μl |
| Voda bez nukleázy | Až 50 μl |
② Lyofilizace: Připravená směs byla lyofilizována v 50μL systému
③ Připravte reakční směs
| Komponent | Hlasitost |
| Lyofilizovaná směs | 1 kus |
| 10 × základní směsa | 5 μl |
| Šablony DNA/RNA b | × μL |
| Voda bez nukleázy | Až 50 μl |
Poznámky:
1) a.10xPrimer Mix: 16 μM FIP/BIP, 2 μM F3/B3, 4 μM smyčka F/B;
2) b.DEPC (rozpustný ve vodě) se doporučuje pro templ nukleové kyseliny.
1.Inkubujte při 65 °C po dobu 30-45 minut, kterou lze vhodně prodloužit podle reakční doby změny barvy.
2.Podle pouhého oka byla žlutá pozitivní a červená negativní.
Poznámky
1.Sůl se může objevit na dně zkumavky s pufrem, krátce promíchejte nebo zkumavky několikrát obraťte, aby se důkladně promíchaly při pokojové teplotě.
2.Reakční teplotu lze optimalizovat mezi 62 ℃ a 68 ℃ podle stavu primerů.
3.Zabalená činidla by neměla být delší dobu vystavena vzduchu.
4.Reakce červeného a žlutého zbarvení závisí na změně pH reakčního systému, nepoužívejte prosím skladovací roztok Tris obsahující nukleovou kyselinu, doporučuje se použít ddH2O uložená nukleová kyselina;
5.Experiment by měl být standardizován, včetně přípravy reakčního systému, lyofilizace a zpracování vzorku a procesu přidávání vzorku;
6.Aby se předešlo kontaminaci, doporučuje se připravit reakční systém na ultračisté lavici, v jiných Přidejte šablony do digestoře místnosti, aby se zabránilo falešně pozitivní interferenci.
