Bst 2.0 DNA polymeráza (bez glycerolu)
Bst DNA polymeráza V2 je odvozena z Bacillus stearothermophilus DNA polymerázy I, která má aktivitu 5′→3′ DNA polymerázy a silnou aktivitu nahrazující řetězec, ale žádnou aktivitu 5′→3′ exonukleázy.Bst DNA Polymerase V2 je ideálně vhodná pro vytěsňování vláken, izotermickou amplifikaci LAMP (Loop mediated isothermal amplification) a rychlé sekvenování.
Komponenty
| Komponent | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNApolymeráza V2 (bez glycerolu) (8U/μL) | 0,2 ml | 1 ml | 10 ml |
| 10×HC Bst V2 Buffer | 1,5 ml | 2×1,5 ml | 3×10 ml |
| MgSO4(100 mM) | 1,5 ml | 2×1,5 ml | 2×10 ml |
Aplikace
1.Izotermické zesílení LAMP
2. Jednovláknová vytěsňovací reakce DNA
3. Sekvenování genů s vysokým GC
4. Sekvenování DNA na úrovni nanogramů.
Skladovací stav
Přepravujte při teplotě 0°C a skladujte při -25°C~-15°C.
Definice jednotky
Jedna jednotka je definována jako množství enzymu, které inkorporuje 25 nmol dNTP do materiálu nerozpustného v kyselině za 30 minut při 65 °C.
Kontrola kvality
1.Test proteinové čistoty (SDS-PAGE):Čistota Bst DNA polymerázy V2 je ≥99 % stanovena analýzou SDS-PAGE za použití detekce Coomassie Blue.
2.Exonukleázová aktivita:Inkubace 50 μl reakce obsahující minimálně 8 U Bst DNA polymerázy V2 s 1 μg λ -Hind Ⅲ štěpené DNA po dobu 16 hodin při 37 °C nevede k žádné detekovatelné degradaci, jak bylo stanoveno.
3.Aktivita Nickase:Inkubace 50 μl reakce obsahující minimálně 8 U Bst DNA polymerázy V2 s 1 μg pBR322 DNA po dobu 16 hodin při 37 °C nevede k žádné detekovatelné degradaci, jak bylo stanoveno.
4.Aktivita RNázy:Inkubace 50 μl reakce obsahující minimálně 8 U Bst DNA polymerázy V2 s 1,6 μg MS2 RNA po dobu 16 hodin při 37 °C nevede k žádné detekovatelné degradaci, jak bylo stanoveno.
5.DNA E. coli:120 U Bst DNA polymerázy V2 se testuje na přítomnost genomové DNA E. coli pomocí TaqMan qPCR s primery specifickými pro lokus rRNA E. coli 16S.Kontaminace genomové DNA E. coli je ≤1 kopie.
LAMP Reakce
| Komponenty | 25μL |
| 10×HC Bst V2 Buffer | 2,5 μl |
| MgSO4 (100 mM) | 1,5 μl |
| dNTP (každý 10 mM) | 3,5 μl |
| SYTO™ 16 zelená (25×)a | 1,0 μl |
| Základní směsb | 6 μl |
| Bst DNA Polymerase V2 (bez glycerolu) (8 U/ul) | 1 μl |
| Šablona | × μL |
| ddH20 | Až 25 μl |
Poznámky:
1) a.SYTOTM 16 Green (25×): Podle potřeby experimentu lze jako náhradu použít i jiná barviva;
2) b.Směs primerů: získaná smícháním 20 uM FIP, 20 uM BIP, 2,5 uM F3, 2,5 uM B3, 5 uM LF, 5 uM LB a dalších objemů.
Reakce a stav
1 × HC Bst V2 Buffer, inkubační teplota je mezi 60 °C a 65 °C.
Tepelná inaktivace
80 °C, 20 minut
