DNáza I (bez RNázy) (5u/ul)
Kat. č.: HC4007A
DNáza I (deoxyribonukleáza I) je endodeoxyribonukleáza, která může štěpit jednovláknovou nebo dvouvláknovou DNA.Rozpoznává a štěpí fosfodiesterové vazby za vzniku monodeoxynukleotidů nebo jednovláknových nebo dvouvláknových oligodeoxynukleotidů s fosfátovými skupinami na 5'-konci a hydroxylem na 3'-konci.Aktivita DNázy I závisí na Ca2+a může být aktivován ionty dvojmocných kovů, jako je Mn2+a Zn2+.5 mM Ca2+chrání enzym před hydrolýzou.Za přítomnosti Mg2+enzym mohl náhodně rozpoznat a štěpit jakékoli místo na jakémkoli řetězci DNA.Za přítomnosti Mn2+Dvojité řetězce DNA mohou být současně rozpoznány a štěpeny na téměř stejném místě za vzniku fragmentů DNA s plochým koncem nebo fragmentů DNA s lepivým koncem s vyčnívajícími 1-2 nukleotidy.
Komponenty
| název | 0,1 KU | 1KU | 5 KU | 50 KU |
| DNáza I, bez RNázy | 20 μl | 200 μl | 1 ml | 10 ml |
| 10× DNase I Buffer | 1 ml | 1 ml | 5 × 1 ml | 5 × 10 ml |
Podmínky skladování
-25℃~-15℃ pro skladování;Přeprava pod ledovými sáčky.
Instrukce
1. Připravte reakční roztok ve zkumavce bez RNázy podle níže uvedených poměrů:
| Komponent | Hlasitost |
| RNA | X ug |
| 10 × DNase I Buffer | 1μL |
| DNáza I, bez RNázy (5U/μL) | 1 U na µg RNA① |
| ddH2O | Až 10 μl |
Poznámka: ①Vypočítejte objem DNázy I, který je třeba přidat, na základě množství RNA.
2. 37 °C po dobu 15 minut;
3. Přidejte 0,5M EDTA do konečné koncentrace 2,5mM~5mM a zahřívejte na 65 °C po dobu 10 minut, aby se reakce zastavila.Vzorek lze přímo použít pro další reakci, jako je reverzní transkripceexperiment.
Definice jednotky
Jedna jednotka je definována jako množství enzymu, které zcela degraduje 1 ug pBR322DNA za 10 minut při 37 °C.
Kontrola kvality
RNáza:5 U DNázy I s 1,6 ug MS2 RNA po dobu 4 hodin při 37 °C nevede k žádné degradaci.stanoveno elektroforézou na agarózovém gelu.
Poznámky
1. Připravte si 0,5MEDTA sami.
2. Použijte 1U DNázy I na µg RNA.Pokud je však RNA menší než 1 µg, použijte 1U DNázy I.
3. Během provozu umístěte enzym na led.
