Superstart qPCR Premix plus-UNG
Kat. číslo: HCB5071E
Superstart qPCR Premix plus-UNG je specializované činidlo určené pro kvalitativní a kvantitativní reakce PCR v reálném čase pomocí detekce na bázi sondy, vyvinuté speciálně pro lyofilizační procesy.Obsahuje nový hot-start enzym Hotstart Taq plus (DG), který má aktivitu enzymu Taq uzavřenou při pokojové teplotě, účinně inhibuje nespecifickou amplifikaci způsobenou nespecifickým nasedáním primeru nebo tvorbou dimeru primeru za podmínek nízké teploty, čímž zlepšuje specifičnost amplifikační reakce.Toto činidlo používá optimalizovaný qPCR specifický pufr a UNG/dUTP anti-kontaminační systém k dosažení rychlého startu za tepla, což výrazně zlepšuje účinnost a citlivost reakcí qPCR.Dokáže získat dobré standardní křivky v širokém rozsahu kvantifikačních oblastí a přesně provádět kvantifikaci, čímž účinně zabraňuje falešně pozitivní amplifikaci způsobené zbytkovými produkty PCR nebo kontaminací aerosolem.Toto činidlo je kompatibilní s většinou fluorescenčních kvantitativních PCR přístrojů od výrobců, jako jsou Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad a Roche atd., a vykazuje dobrou stabilitu v lyofilizované formě.
Složení činidel
1. 5× HotstartPremix plus-UNG (Mg2+zdarma) (DG)
2. 250 mM MgCl2
3. 4× lyoprotektant (volitelně)
Podmínky skladování
Dlouhodobé skladování při -20 ℃;lze skladovat při 4 °C až 3 měsíce.Před použitím dobře promíchejte avyhněte se opakovanému zmrazování a rozmrazování.
Cyklistický protokol
| Postup | Temp. | Čas | Cyklus |
| Trávení | 50℃ | 2 min | 1 |
| Aktivace polymerázy | 95℃ | 1~5 min | 1 |
| Denaturace | 95℃ | 10~20 s | 40-50 |
| Žíhání a prodlužování | 56~64℃ | 20~60 s | 40-50 |
qPCR Liquid Reaction SyPříprava stonku
|
Složení |
Objem 25 ul |
Objem 50 ul |
Závěrečné soustředění |
| 5× HotstartPremix plus-UNG(Mg2+zdarma) (DG) | 5 ul | 10 ul | 1× |
| 250 mM MgCl2 | 0,45 ul | 0,9 ul | 4,5 mM |
| 4× lyoprotektant1 | 6,25 ul | 12,5 ul | 1× |
| 25× Směs primer-probe2 | 1 ul | 2 ul | 1× |
| DNA šablony3 | —— | —— | —— |
| ddH2O | Do 25 ul | Do 50 ul | —— |
1. Konečná koncentrace 0,2 μM pro primery obvykle poskytuje dobré výsledky;když je reakční výkon špatný, upravte koncentraci primeru v rozsahu 0,2-1μM podle potřeby.Koncentrace sondy je typicky optimalizována v rozsahu 0,1-0,3 μM pomocí gradientových experimentů, aby se našly optimální kombinace.
2. Počet kopií cílových genů obsažených v různých typech templátů se liší;v případě potřeby lze provést ředění gradientem, aby se určilo optimální množství přidaného templátu.
3. Tento systém lze lyofilizovat;když zákazníci používají tento systém bez požadavků na sušení mrazem, lze selektivně přidat 4× lyoprotektant; pokud jsou požadovány produkty lyofilizované, během fáze ověřování účinnosti produktu s kapalnými činidly musí přidat 4× lyoprotektan, aby byla zajištěna konzistence s lyofilizovanými složkami systému a efekty.
Při použití systémud pro lyofilizaci připravte Systém as Následující:
| Složení | 25ul Reakční systém |
| 5 × HotstartPremix plus-UNG (Mg2+zdarma) (DG) | 5 ul |
| 250 mM MgCl2 | 0,45 ul |
| 4× lyoprotektant | 6,25 ul |
| 25× Směs primer-probe | 1 ul |
| ddH2O | Do 18~20 ul |
* Pokud potřebujete jiné systémy pro lyofilizaci, poraďte se prosím samostatně.
Lyofilizační processs
| Postup | Temp. | Čas | Stav | Tlak |
| Předmražení | 4℃ | 30 min | Držet |
1 atm |
| -50 ℃ | 60 min | Chlazení | ||
| -50 ℃ | 180 min | Držet | ||
| Primární sušení | -30 ℃ | 60 min | Topení |
Maximální vakuum |
| -30 ℃ | 70 min | Držet | ||
| Sekundární sušení | 25℃ | 60 min | Topení |
Maximální vakuum |
| 25℃ | 300 min | Držet |
2. Výše uvedený lyofilizační proces je pouze orientační.Různé typy produktů a různé lyofilizátory mají různé parametry, takže úpravy lze provést podle skutečnostipodmínky během používání.
3. Různé lyofilizační procesy mohou být vhodné pro různé velikosti šarží lyofilizovaných látekproduktů, takže při použití pro velkovýrobu je nutné provést dostatečné testování validace.
Návod k použití lyofilizaced prášek
1. Krátce centrifugujte lyofilizovaný prášek;
2. Přidejte templát nukleové kyseliny k lyofilizovanému prášku a přidejte vodu až na 25 µl;
3. Dobře promíchejte odstředěním a spusťte na stroji.
Kontrola kvality:
1. Funkční testování: senzitivita, specificita, reprodukovatelnost qPCR.
2. Žádná exogenní nukleázová aktivita, žádná exogenní endo/exonukleázová kontaminace.
Technické informace:
1. Superstart qPCR Premix plus-UNG používá nový hot-start enzym, který umožňuje rychlý horký start během 1~5 minut;díky speciální formulaci pufru je vhodný pro multiplexní fluorescenční kvantitativní PCR reakce.
2. Má vyšší specificitu, která významně zlepšuje citlivost fluorescenční kvantitativní PCR limitní detekce, čímž se amplifikační křivky normalizují, hodnota fluorescence dosahuje zjevného zlepšení při nízkých koncentracích templátů, vhodná jako vysoce citlivá fluorescenční kvantitativní PCR detekční činidla.
3. Pro primery s nižší teplotou nasedání nebo delšími než 200bp fragmenty se doporučuje 3-kroková metoda.
4. Účinnost využití dUTP a citlivost na enzym UNG se pro různé cílové geny liší, takže pokud použití systému UNG vede ke snížení citlivosti detekce, měl by být reakční systém upraven a optimalizován.Pokud potřebujete technickou podporu, kontaktujte naši společnost.
5. Před a po amplifikaci používejte vyhrazená místa a pipety, během provozu používejte rukavice a často je vyměňujte;po dokončení PCR neotevírejte reakční zkumavku, abyste minimalizovali kontaminaci vzorků produkty PCR.
