2×HiF Taq plus Master Mix
Kat. číslo: HCR2014B
HIF Taq plus Master Mix (s barvivem) je 2× předem namíchaný roztok připravený k použití obsahující Plus HIF DNA polymerázu, dNTP a optimalizovaný pufr.Dvě monoklonální protilátky při pokojové teplotě, které inhibují aktivitu polymerázy a aktivitu 3′→5′exonukleázy jsou přidány do master mixu pro snadnou a vysoce specifickou Hot Start PCR.Extenzní faktor se přidává do master mixu, aby enzym získal kapacitu amplifikace dlouhých fragmentů, délka amplifikace může být až 13 kb, enzym má 5′→3′ DNA polymerázovou aktivitu a 3′→5′ exonukleázová aktivita, její věrnost je 83krát větší než u Taq DNA polymerázy, což je 9krát větší než u běžné DNA polymerázy.Je vhodný pro amplifikaci komplexních šablon, amplifikačním produktem je tupý konec.
2×HIF Taq plus Master Mix (s barvivem) má výhody rychlé a snadné, vysoké citlivosti, silné specificity, dobré stability atd., reakční systém potřebuje pouze přidat primery a templáty a může být amplifikován pomocí dvou krokový protokol, zjednodušující experimentální kroky a úsporu času.Tento produkt obsahuje indikátorová barviva pro elektroforézu a produkty PCR lze použít přímo pro elektroforézu.Kromě toho produkt obsahuje také specifické ochranné činidlo, takže master mix může udržovat stabilní aktivitu po opakovaném zmrazování a rozmrazování.
Podmínky skladování
Produkty by měly být skladovány při -25~-15℃ po dobu 1 roku.
Specifikace
| Specifikace produktu | Master Mix |
| Koncentrace | 2× |
| Hot Start | Vestavěný Hot Start |
| Převis | Otupit |
| Rychlost reakce | Rychlý |
| Velikost (konečný produkt) | Až 13 kb |
| Podmínky pro přepravu | Suchý led |
| Typ produktu | Vysoce věrné PCR premixy |
Instrukce
1.PCR reakční systém
| Komponenty | Objem (μL) |
| DNA šablona | Vhodný |
| Forward primer (10 μmol/L) | 2.5 |
| Reverzní primer (10 μmol/L) | 2.5 |
| 2×HIF Taq plus Master Mix | 25 |
| ddH2O | do 50 |
2.Doporučené použití různých šablon
| Typ šablony | Amplifikujte fragmenty od 1 kb do 10 kb |
| Genomová DNA | 50 ng-200 ng |
| Plazmidová nebo virová DNA | 10pg-20ng |
| cDNA | 1-2,5 µl (Nepřekračujte 10 % konečného objemu reakce PCR) |
3.Amplifikační protokol
1) Dvoustupňový protokol (šablona složitosti)
| Krok cyklu | Temp. | Čas | Cykly |
| Počáteční denaturace | 98 ℃ | 3 min | 1 |
| Denaturace | 98 ℃ | 10 sekund | 30-35 |
| Rozšíření | 68 ℃ | 30 s/kb | |
| Konečné prodloužení | 72 ℃ | 5 minut | 1 |
2) Třístupňový protokol (běžný protokol)
| Krok cyklu | Temp. | Čas | Cykly |
| Počáteční denaturace | 98 ℃ | 3 min | 1 |
| Denaturace | 98 ℃ | 10 sekund | 30-35 |
| Žíhání | 60℃ | 20 sec | |
| Rozšíření | 72 ℃ | 30 s/kb | |
| Konečné prodloužení | 72 ℃ | 5 minut | 1 |
3) Protokol žíhacího gradientu (šablona složitosti)
| Krok cyklu | Teplota | Čas | Cykly |
| Počáteční denaturace | 98 ℃ | 3 min | 1 |
| Denaturace | 98 ℃ | 10 sec | 15 (snížení o 1℃ na cyklus) |
| Gradientní žíhání | 70-55 ℃ | 20 sec | |
| Rozšíření | 72 ℃ | 30 s/kb | |
| Denaturace | 98 ℃ | 10 sec |
20 |
| Žíhání | 55 ℃ | 20 sec | |
| Rozšíření | 72 ℃ | 30 s/kb | |
| Konečné prodloužení | 72 ℃ | 5 minut | 1 |
Funkce pod jiným protokolem zesílení
| Protocol | Dva kroky | Třístupňový | Gradientní žíhání |
| Spec. | rychle | střední | pomalý |
| Specifičnost | vysoký | střední | vysoký |
| Výtěžek PCR | střední | vysoký | střední |
| Míra detekce | vysoký | střední | vysoký |
Poznámky
Používejte prosím nezbytné OOP, jako je laboratorní plášť a rukavice, abyste zajistili své zdraví a bezpečnost!
