M-MLV reverzní transkriptáza
RevScript Reverzní transkriptáza se získává technologií genetického inženýrství.Má vyšší schopnost syntézy cDNA, tepelnou stabilitu a limit reakční teploty (do 60°C).Syntetizovaný produkt cDNA má až 10 kb.Zvyšuje afinitu templátů a je vhodný pro reverzní transkripci RNA templátů se složitou sekundární strukturou nebo geny s nízkým počtem kopií.
Komponenty
| Komponent | HC2003B-01 (10 000 U) | HC2003B-02 (5*10 000U) | HC2003B-03 (200 000 U) |
| RevScript reverzní transkriptáza (200 U/μL) | 50 μL | 5×50 μl | 1 ml |
| 5 × vyrovnávací paměť RevScript | 250 μl | 1,25 ml | 5 ml |
Skladovací stav
Tento produkt by měl být skladován při -25°C~-15°C po dobu 2 let.
Definice jednotky
Jedna jednotka inkorporuje 1 nmol dTTP do materiálu nerozpustného v kyselině během 10 minut při 37 °C s použitím Oligo(dT) jako primerů.
Nastavení reakce
1. Denaturace templátu RNA (Tento krok je volitelný, denaturace templátu RNA pomáhá otevřít sekundární struktury, což zlepší výtěžek prvního vlákna cDNA.)
| Komponenty | Hlasitost (μL) |
| ddH bez RNázy2O | Do 13 |
| oligo (dT)18 (50 μmol/L) nebo Random Primer (50 μmol/L) Nebo genově specifické primery (2 μmol/l) | 1 |
| nebo 1 | |
| nebo 1 | |
| RNA templát | Xa |
Poznámky:
1) a: Celková RNA: 1-5 ug nebo mRNA: 1-500 ng
2) Inkubace při 65 °C po dobu 5 minut, poté okamžité přenesení na led, aby se na 2 minuty zchladilo.Krátkou centrifugací shromážděte reakční kapalinu a přidejte reakční roztok pro reverzní transkripci, jak je uvedeno v následující tabulce.Jemně promíchejte pipetou.
1.Příprava reakční směsi (objem 20 μL)
| Komponenty | Hlasitost (μL) |
| Směs z předchozího kroku | 13 |
| 5×Vyrovnávací paměť | 4 |
| Směs dNTP (10nmol/l) | 1 |
| Reverzní transkriptáza (200 U/μL) | 1 |
| Inhibitor RNázy (40 U/μL) | 1 |
1.Reakci proveďte za následujících podmínek:
| Teplota (°C) | Čas |
| 25 °Ca | 5 minut |
| 42 °Cb | 15-30 min |
| 85 °Cc | 5 minut |
Poznámky:
1) a.Inkubace při 25 °C po dobu 5 minut je nutná pouze pro použití náhodných hexamerů.Při použití Oligo (dT) tento krok přeskočte18nebo Gene Specific Primer.
2) b.Doporučená teplota reverzní transkripce je 42°C. U templátů s komplikovanými sekundárními strukturami nebo vysokým obsahem GC se doporučuje zvýšit reakční teplotu na 50-55°C.
3) c.Zahřívání na 85 °C po dobu 5 minut pro inaktivaci reverzní transkriptázy.
4) Produkt lze přímo použít v reakcích PCR nebo qPCR nebo jej lze krátkodobě skladovat při -20 °C.Pro dlouhodobé skladování se doporučuje produkty zarovnat a skladovat při -80°C.Vyhněte se častému zmrazování a rozmrazování.
5) Produkt je vhodný pro jednokrokovou RT-qPCR, doporučuje se přidat 10-20 U reverzní transkriptázy na každých 25μL reakčního systému nebo postupně zvyšovat množství reverzní transkriptázy podle aktuální situace.
Poznámky
1.Udržujte experimentální oblast v čistotě;Během provozu je třeba používat čisté rukavice a masky.Všechny spotřební materiály použité v experimentu by měly být bez RNázy, aby se zabránilo kontaminaci RNázou.
2. Všechny postupy by měly být prováděny na ledu, aby se zabránilo degradaci RNA.
3. K zajištění vysoké účinnosti reverzní transkripce se doporučují vysoce kvalitní vzorky RNA.
4. Tento produkt je určen pouze pro výzkumné účely.
5.Pro vaši bezpečnost používejte laboratorní pláště a jednorázové rukavice.
