One Step Fast RT-qPCR Probe Premix-UNG
Kat. číslo: HCR5143A
One Step RT-qPCR Probe Kit (FOR FAST) je souprava pro rychlou detekci RT-qPCR založená na sondě vhodná pro single-plex nebo multiplexní kvantitativní PCR s použitím RNA jako templátu (jako je RNA virus).Tento produkt využívá novou generaci protilátkou modifikované Taq DNA polymerázy a jednokrokovou vyhrazenou reverzní transkriptázu s optimalizovaným pufrem pro rychlou amplifikaci, která má vyšší rychlost amplifikace, vyšší účinnost a specificitu amplifikace.Podporuje vyváženou amplifikaci v single-plex i multiplexu vzorků s nízkou a vysokou koncentrací v krátkém čase.
Komponenty
1. 5× RT-qPCR buffer (U+)
2. Směs enzymů (U+)
Poznámky:
A.5×RT-qPCR pufr (U+) obsahuje dNTP a Mg2+;
b.Enzymová směs (U+) zahrnuje reverzní transkriptázu, Hot Start Taq DNA polymerázu, inhibitor RNázy a UDG;
C.Používejte hroty bez RNázy, EP zkumavky atd.
Před použitím důkladně promíchejte 5×RT-qPCR pufr (U+).Pokud se po rozmrazení objeví nějaké sraženiny, počkejte, až se pufr vrátí na pokojovou teplotu, promíchejte a rozpusťte je a poté je normálně použijte.
Podmínky skladování
Výrobek je dodáván se suchým ledem a může být skladován při -25~-15℃ po dobu 1 roku.
Instrukce
1. Reakce Systém
| Komponenty | Objem (20 μl reakce) |
| 2 × RT-qPCR pufr | 4 μl |
| Směs enzymů (U+) | 0,8 μl |
| Primer Forward | 0,1 až 1,0 uM |
| Primer Reverse | 0,1 až 1,0 uM |
| Sonda TaqMan | 0,05~0,25 uM |
| Šablona | X μL |
| Voda bez RNázy | až 25 μl |
Poznámky: Reakční objem je 10-50μL.
2. Cyklistický protokol (Standard)
| Cyklus krok | Temp. | Čas | Cykly |
| Reverzní transkripce | 55 ℃ | 10 min | 1 |
| Počáteční denaturace | 95 ℃ | 30 sec | 1 |
| Denaturace | 95 ℃ | 10 sec | 45 |
| Žíhání/prodlužování | 60 ℃ | 30 sec |
| Cyklistický protokol (Rychle) Cyklus krok |
Temp. |
Čas |
Cykly |
| Reverzní transkripce | 55 ℃ | 5 minut | 1 |
| Počáteční denaturace | 95 ℃ | 5 s | 1 |
| Denaturace | 95 ℃ | 3 s | 43 |
| Žíhání/prodlužování | 60 ℃ | 10 s |
Poznámky:
A.Teplota reverzní transkripce je mezi 50 ℃ až 60 ℃, zvýšení teploty pomáhá zesílit složité struktury a šablony s vysokým obsahem CG;
b.Optimální teplotu nasedání je třeba upravit na základě hodnoty Tm primeru a vybrat nejkratší dobu pro sběr fluorescenčního signálu na základě přístroje Real Time PCR.
Poznámky
Noste prosím nezbytné OOP, jako je laboratorní plášť a rukavice, abyste zajistili své zdraví a bezpečnost!
