Genotypizační sada myši

Kat. číslo: HCR2021A

Tento produkt je kit navržený pro rychlou identifikaci myších genotypů, včetně extrakce surové DNA a systému PCR amplifikace.Produkt lze použít pro PCR amplifikaci přímo z myšího ocasu, ucha, prstu a dalších tkání po jednoduchém štěpení pomocí Lysis Buffer a Proteinase k.Žádné štěpení přes noc, extrakce fenol-chloroformem nebo čištění na koloně, což je jednoduché a zkracuje časovou náročnost experimentů.Produkt je vhodný pro amplifikaci cílových fragmentů až do 2 kb a multiplexní PCR reakce s až 3 páry primerů.2×Mouse Tissue Direct PCR Mix obsahuje geneticky upravenou DNA polymerázu, Mg²⁺dNTPs a optimalizovaný systém pufru pro zajištění vysoké účinnosti amplifikace a tolerance inhibitoru, takže PCR reakce lze provádět přidáním templátu a primerů a rehydratací produktu na 1×.Produkt PCR amplifikovaný tímto produktem má výraznou „A“ bázi na 3' konci a lze jej po purifikaci použít přímo pro klonování TA.

Komponenty

Podmínky skladování

Produkty by měly být skladovány při -25~-15℃ po dobu 2 let.Po rozmrazení lze Lysis Buffer skladovat při 2~8℃ pro krátkodobé vícenásobné použití a při použití jej dobře promíchat.

aplikace

Tento produkt je vhodný pro analýzu knockout myší, transgenní detekci, genotypizaci a tak dále.

Funkce

1.Jednoduchá operace: není potřeba extrahovat genomovou DNA;

2.Široké použití: vhodné pro přímou amplifikaci různých myších tkání.

Instrukce

1.Uvolnění genomové DNA

1) Příprava lyzátu

Tkáňový lyzát se připravuje podle počtu vzorků myší, které mají být lyžovány (tkáňový lyzát by měl být připraven na místě podle dávkování a před použitím důkladně promíchán) a poměr reagencií požadovaný pro jeden vzorek je následující:

2) Příprava vzorku a lýza

Doporučené použití tkáně

Odeberte přiměřené množství vzorků myší tkáně do čistých centrifugačních zkumavek, přidejte 200 μl čerstvého tkáňového lyzátu do každé centrifugační zkumavky, vortexujte a protřepejte, poté inkubujte při 55 °C po dobu 30 minut a poté zahřívejte na 98 °C po dobu 3 minut.

3) Centrifugace

Lyzát dobře protřepejte a centrifugujte při 12 000 ot./min. po dobu 5 minut.Supernatant může být použit jako templát pro PCR amplifikaci.Pokud je šablona potřebná pro skladování, přeneste supernatant do jiné sterilní centrifugační zkumavky a skladujte při -20 °C po dobu 2 týdnů.

2.PCR amplifikace

Odstraňte 2×Mouse Tissue Direct PCR Mix z -20°C a rozmrazte na ledu, promíchejte dnem vzhůru a připravte PCR reakční systém podle následující tabulky (pracujte na ledu):

Poznámka:

a) Přidané množství by nemělo překročit 1/10 systému, a pokud se přidá příliš mnoho, může být inhibována PCR amplifikace.

Doporučené podmínky PCR

Poznámka:

a) Teplota žíhání: S ohledem na hodnotu Tm primeru se doporučuje nastavit teplotu žíhání na nižší hodnotu Tm primeru +3~5°C.

Běžné problémy a řešení

1.Žádné cílené proužky

1) Nadměrný produkt lýzy.Vyberte nejvhodnější množství šablony, obvykle ne více než 1/10 systému;

2) Příliš velká velikost vzorku.Nařeďte lyzát 10krát a poté amplifikujte nebo zmenšete velikost vzorku a znovu lýzu;

3) Vzorky tkání nejsou čerstvé.Doporučuje se použít vzorky čerstvé tkáně;

4) Špatná kvalita základního nátěru.Pro amplifikaci použijte genomovou DNA k ověření kvality primeru a optimalizaci návrhu primeru.

2.Nespecifická amplifikace

1) Teplota žíhání je příliš nízká a počet cyklů je příliš vysoký.Zvyšte teplotu žíhání a snižte počet cyklů;

2) Koncentrace šablony je příliš vysoká.Snižte množství templátu nebo templát po amplifikaci 10krát nařeďte;

3) Špatná specificita primeru.Optimalizujte návrh základního nátěru.

Poznámky

1.Aby se zabránilo křížové kontaminaci mezi vzorky, je třeba připravit více vzorkovacích nástrojů a povrch nástrojů lze po každém vzorkování očistit 2% roztokem chlornanu sodného nebo čističem nukleových kyselin, pokud je vyžadováno opakované použití.

2.Doporučuje se použít čerstvé myší tkáně a objem vzorku by neměl být příliš velký, aby nedošlo k ovlivnění výsledků amplifikace.

3.Lysis Buffer by se měl vyhýbat častému zmrazování a rozmrazování a může být skladován při 2~8 °C pro krátkodobé vícenásobné použití.Pokud se skladuje při nízké teplotě, může dojít k vysrážení a musí se před použitím zcela rozpustit.

4.PCR Mix by se měl vyhýbat častému zmrazování a rozmrazování a může být skladován při 4 °C pro krátkodobé opakované použití.

5.Tento produkt je určen pouze pro vědecký experimentální výzkum a neměl by být používán pro klinickou diagnostiku nebo léčbu.