Inhibitor RNase
Inhibitor myší RNázy je rekombinantní inhibitor myší RNázy exprimovaný a purifikovaný z E. coli.Nekovalentní vazbou se váže na RNázu A, B nebo C v poměru 1:1, čímž inhibuje aktivitu tří enzymů a chrání RNA před degradací.Není však účinný proti RNáze 1, RNáze T1, S1 nukleáze, RNáze H nebo RNáze z Aspergillus.Myší inhibitor RNázy byl testován pomocí RT-PCR, RT-qPCR a IVT mRNA a byl kompatibilní s různými komerčními reverzními transkriptázami, DNA polymerázami a RNA polymerázami.
Ve srovnání s lidskými inhibitory RNázy neobsahuje myší inhibitor RNázy dva cysteiny, které jsou vysoce citlivé na oxidaci, která způsobuje inaktivaci inhibitoru.Díky tomu je stabilní při nízkých koncentracích DTT (méně než 1 mM).Díky této vlastnosti je vhodný pro použití v reakcích, kde jsou vysoké koncentrace DTT nepříznivé pro reakci (např. RT-PCR v reálném čase).
Aaplikace
Tento produkt může být široce používán v jakémkoli experimentu, kde je možná interference RNázy, aby se zabránilo degradaci RNA, jako například:
1.Syntéza prvního vlákna cDNA, RT-PCR, RT-qPCR atd.
2.Chrání RNA před degradací během in vitro transkripce/translace (např. in vitro virový replikační systém).
3.Inhibice aktivity RNázy během separace a čištění RNA.
Podmínky skladování
Produkt lze skladovat při teplotě -25～-15 ℃, platnost 2 roky.
Vyrovnávací paměť úložiště
50 mM KCI, 20 mM HEPES-KOH (pH 7,6, 25 °C), 8 mM DTT a 50% glycerol.
Definice jednotky
Množství inhibitoru myší RNázy potřebné k inhibici aktivity 5 ng ribonukleázy A o 50 % bylo definováno jako jedna jednotka (U).
Molekulová hmotnost bílkovin
Molekulová hmotnost myšího inhibitoru RNázy je 50 kDa.
Kontrola kvality
Exonukleáza Aktivita:
40 U myšího inhibitoru RNázy s 1 μg λ-Hind III štěpené DNA při 37 °C po dobu 16 hodin nevede k žádné degradaci, jak bylo stanoveno elektroforézou na agarózovém gelu.
Endonukleázová aktivita:
40 U myšího inhibitoru RNázy s 1 μg λ DNA při 37 °C po dobu 16 hodin nevede k žádné degradaci, jak bylo stanoveno elektroforézou na agarózovém gelu.
Nicking Aktivita:
40 U myšího inhibitoru RNázy s 1 μg pBR322 při 37 °C po dobu 16 hodin nevede k žádné degradaci, jak bylo stanoveno elektroforézou na agarózovém gelu.
RNáza Aktivita:
40 U myšího inhibitoru RNázy s 1,6 μg MS2 RNA po dobu 4 hodin při 37 °C nevede k žádné degradaci, jak bylo stanoveno elektroforézou na agarózovém gelu.
E.coli DNA:
40 U myšího inhibitoru RNázy se testuje na přítomnost genomové DNA E. coli pomocí TaqMan qPCR s primery specifickými pro lokus rRNA E. coli 16S.Kontaminace genomové DNA E. coli je ≤ 0,1 pg/40 U.
Npoznámkas
1. Násilné oscilace nebo míchání povede k inaktivaci enzymu.
2. Optimální teplotní rozsah tohoto inhibitoru byl 25-55 ℃ a byl inaktivován při 65 ℃ a výše.
3. Aktivity RNázy H, RNázy 1 a RNázy T1 nebyly inhibovány myším inhibitorem RNázy.
4. Inhibice aktivity RNázy byla zjištěna v širokém rozmezí pH (pH 5-9 byly všechny aktivní) a nejvyšší aktivita byla pozorována při pH 7-8.
5. Protože si ribonukleázy typicky zachovávají aktivitu za denaturačních podmínek, je třeba dbát na to, aby nedošlo k denaturaci molekul inhibitoru RNázy, které vytvořily komplex s ribonukleázou.Aby se zabránilo uvolňování aktivní ribonukleázy, je třeba se vyhnout teplotám vyšším než 50 °C a vysokým koncentracím močoviny nebo jiných denaturačních činidel.
