Rnase A
Ribonukleáza A (RNázaA) je jednovláknový polypeptid obsahující 4 disulfidové vazby s molekulovou hmotností přibližně 13,7 kDa.RNáza A je endoribonukleáza, která specificky degraduje jednovláknovou RNA na zbytcích C a U.Konkrétně štěpení rozpoznává fosfodiesterovou vazbu vytvořenou 5′-ribózou nukleotidu a fosfátovou skupinou na 3′-ribóze sousedního pyrimidinového nukleotidu, takže 2,3′-cyklické fosfáty jsou hydrolyzovány na odpovídající 3. ′nukleosidfosfáty (např. pG-pG-pC-pA-pG je štěpen RNázou A za vzniku pG-pG-pCp a A-PG).RNáza A je nejaktivnější při štěpení jednovláknové RNA.Doporučená pracovní koncentrace je 1-100μG/ml, kompatibilní s různými reakčními systémy.Nízká koncentrace soli (0-100 mM NaCl) může být použita ke štěpení řetězců jednořetězcové RNA, dvouřetězcové RNA a RNA vytvořených hybridizací RNA-DNA.Avšak při vysoké koncentraci soli (≥0,3 M) RNáza A specificky štěpí pouze jednořetězcovou RNA.
RNáza A se nejčastěji používá k odstranění RNA během přípravy plazmidové DNA nebo genomové DNA. Zda je DNáza během procesu přípravy aktivní či nikoli, může snadno ovlivnit reakci.K inaktivaci aktivity DNázy lze použít tradiční metodu varu ve vodní lázni.Tento produkt neobsahuje DNázu a proteázu a před použitím nevyžaduje tepelné ošetření.Kromě toho může být tento produkt také použit v experimentech molekulární biologie, jako je analýza ochrany RNázy a analýza sekvence RNA.
Podmínky skladování
Produkt lze skladovat při teplotě -25～-15℃, platnost 2 roky.
Instrukce
Toto je jedna z běžných metod přípravy skladovacího roztoku RNázy A.Dá se připravit i podlejiné metody podle tradičních metod v laboratoři nebo v referenční literatuře (napřpřímo rozpouštějící v 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 nebo roztoku Tris-NaCl)
1. Použijte 10 mM octan sodný (pH 5,2) k přípravě 10 mg/ml zásobního roztoku RNázy A
2. Zahřívání na 100 ℃ po dobu 15 min
3. Ochlaďte na pokojovou teplotu, přidejte 1/10 objemu 1 M Tris-HCl (pH 7,4), upravte jeho pH na 7,4 (pronapříklad přidejte 500 ml 10g/ml skladovacího roztoku RNázy 1M Tris-HCL, PH7,4)
4. V dílčím balení při -20 °C pro skladování v mrazáku, které může být stabilní až 2 roky.
[Poznámky]: Při vaření roztoku RNázyA za neutrálních podmínek se vytvoří sraženina RNázy;Vařte ji při nižším pH, a pokud dojde k vysrážení, lze ji pozorovat, což může být způsobeno přítomností proteinových nečistot.Pokud se po varu objeví sediment, nečistoty mohou být odstraněny vysokorychlostním odstředěním (13 000 ot./min) a poté zabaleny pro zmrazení.
Informace o produktu
| Synonyma | ribonukleáza I;pankreatická ribonukleáza;Ribonukleáza 3'-pyrimidnooligonukleotidohydroláza;RNáza A;Endoribonulceáza I |
| Č. CAS | 9001-99-4 |
| Vzhled | Bílý lyofilizovaný prášek |
| Molekulární váha | ~ 13,7 kDa (aminokyselinová sekvence) |
| Hodnota PH | 7,6 (rozsah aktivity 6–10) |
| Vhodná teplota | 60℃ (rozsah aktivity 15-70℃) |
| Aktivační agent | Na2+.K+ |
| Inhibitor | Inhibitor RNase |
| Metoda inaktivace | Nelze inaktivovat zahřátím, doporučuje se použít centrifugační kolonu |
| Původ | Hovězí |
| Rozpustnost | Rozpustný ve vodě (10 mg/ml) |
| Ztráta na suchu | ≤ 5,0 % |
| Enzymová aktivita | ≥60 Kunitzových jednotek/mg |
| Izoelektrický bod | 9.6 |
Poznámky
Pro vaši bezpečnost a zdraví používejte při provozu laboratorní pláště a jednorázové rukavice.
