Citlivé na teplotu UNG
Teplotně citlivý UNG (TS-UNG) je získaný rekombinantní expresí v E. coli.Enzym katalyzuje uvolňování volného uracilu z jednovláknové a dvouvláknové DNA obsahující uracil a je neaktivní proti RNA.Ve srovnání s konvenčním enzymem UNG genového původu E. coli má enzym TS-UNG vyšší aktivitu při nízkých teplotách (20℃~37℃) a je citlivý na teplotu a snadno se inaktivuje (50℃), čímž zabraňuje degradaci amplifikace obsahující dUTP produktů při pokojové teplotě zbytkovou aktivitou, která může zůstat po inaktivaci konvenčního enzymu UNG.Proto je TS-UNG enzym vhodný nejen pro reakci zabraňující kontaminaci PCR, ale také dobře odpovídá amplifikačnímu programu RT-PCR a může být použit v reakci prevence kontaminace RT-PCR.
Doporučená aplikace
Zesilování prevence kontaminace
Skladovací stav
-20°C pro dlouhodobé skladování, před použitím je třeba dobře promíchat, vyhnout se častému zmrazování a rozmrazování.
Vyrovnávací paměť úložiště
20 mM Tris-HCl (pH 7,5), 100 mM NaCl, 0,1 mM EDTA, 1 mM DTT, stabilizátor, 50 % glycerol.
Definice jednotky
Množství enzymu potřebné k degradaci 1 ug jednořetězcové DNA obsahující báze dU za 1 hodinu při 37 °C je 1 jednotka aktivity (U).
Kontrola kvality
1.Elektroforetická čistota SDS-PAGE vyšší než 98 %
2.Degradační aktivita, kontrola mezi dávkami, stabilita
3.Žádná exogenní nukleázová aktivita, žádná exogenní endonukleáza nebo kontaminace exonukleázou.
Instrukce
| Komponenty | Objem (μL) | Závěrečné soustředění |
| 10 × PCR pufr (bez dNTP, Mg2+volný, uvolnit) | 5 | 1× |
| dUTP (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 uM |
| dUTP (nahradit dTTP) | - | 200-600 uM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 μl | 1-4 mM |
| 5 U/μL Taq | 0,25 | 1,25 U |
| 1 U/μLTS-UNG | 0,5 (0,1-0,5) | 0,5 U (0,1–0,5 U) |
| 25 × základní směsA | 2 | 1× |
| Šablona | - | ＜1 μg/reakci |
| ddH20 | Do 50 | - |
Poznámka: a: Při použití pro qPCR/qRT-PCR by měla být fluorescenční sonda přidána do reakčního systému.Obvykle může poskytnout dobré výsledky konečná koncentrace primeru 0,2 μM;když je reakční výkon špatný, lze koncentraci primeru upravit v rozsahu 0,2-1 μM.Obvykle je koncentrace sondy optimalizována v rozmezí 0,1-0,3 μM.K nalezení nejlepší kombinace primeru a sondy lze provést experimenty s koncentračním gradientem.
Poznámky
1.Optimální reakční teplota enzymu TS-UNG je relativně nízká a lze ji optimalizovat v rozmezí 20℃~37℃, dávkování enzymu a reakční dobu lze optimalizovat v rozmezí 0,1~0,5 U, 5~ 10 min;a enzym může být inaktivován v procesu reverzní transkripce.
2.Je vhodný pro PCR a RT-PCR, aby se zabránilo kontaminaci.
3.Vyhněte se častému zmrazování a rozmrazování a nevystavujte velkým teplotním výkyvům.
4.Různé geny, které mají být amplifikovány, mají různou účinnost využití dUTP a citlivost na enzym UNG, proto pokud použití systému UNG vede ke snížení citlivosti detekce, měl by být reakční systém upraven a optimalizován, pokud potřebujete technickou podporu, kontaktujte naše společnost.
