Hotstart Taq DNA polymeráza
Hot Start Taq DNA Polymerase (modifikace protilátky) je termostabilní DNA polymeráza s horkým startem od Thermus aquaticus YT-1, která má 5′→3′ polymerázovou aktivitu a 5' klapkovou endonukleázovou aktivitu.Hot-start Taq DNA polymeráza je Taq DNA polymeráza, která je modifikována termolabilními Taq protilátkami.Modifikace protilátky zvýšila specificitu, citlivost a výtěžek PCR.
Komponenty
| Komponent | HC1012A-01 | HC1012A-02 | HC1012A-03 | HC1012A-04 |
| 5×HC Taq Buffer | 4×1 ml | 4×10 ml | 4×50 ml | 5×400 ml |
| Hot Start Taq DNA polymeráza (upravená protilátka) (5 U/μL) | 0,1 ml | 1 ml | 5 ml | 10×5 ml |
Aplikace
10 mM Tris-HCl (pH 7,4 při 25 °C), 100 mM KCI, 0,1 mM EDTA, 1 mM dithiothreitol, 0,5 % Tween20, 0,5 % IGEPALCA-630 a 50 % glycerol.
Skladovací stav
Přepravujte při teplotě 0°C a skladujte při -25°C~-15°C.
Definice jednotky
Jedna jednotka je definována jako množství enzymu, které inkorporuje 15 nmol dNTP do materiálu nerozpustného v kyselině za 30 minut při 75 °C.
Kontrola kvality
1.Endnukleázová aktivita:Inkubace 20 U enzymu se 4 ug pUC19 DNA po dobu 4 hodin při 37 °C nevedla k žádné detekovatelné degradaci DNA, jak bylo stanoveno gelovou elektroforézou.
2.5 kb Lambda PCR:25 cyklů PCR amplifikace 5 ng Lambda DNA s 1,25 jednotkami Taq DNA polymerázy v přítomnosti 200 uM dNTP a 0,2 uM primerů vede k očekávanému 5 kb produktu.
3.Exonukleázová aktivita:Inkubace 50 µl reakce obsahující minimálně 12,5 U Taq DNA polymerázy s 10 nmol 5´-FAM oligonukleotidu po dobu 30 minut při 37 °C neposkytuje žádnou detekovatelnou degradaci.
4.Aktivita RNázy:Inkubace 10 ul reakce obsahující 20 U enzymu s 1 μg RNA transkriptů po dobu 2 hodin při 37 °C nevedla k žádné detekovatelné degradaci RNA, jak bylo stanoveno gelovou elektroforézou.
5.Tepelná inaktivace:Ne.
Reakční systém
| Komponenty | Hlasitost |
| DNA šablonya | volitelný |
| 10 μM Forward Primer | 0,5 μl |
| 10 μM Reverse Primer | 0,5 μl |
| dNTP Mix (10 mM každý) | 0,5 μl |
| 5×HC Taq Buffer | 5 μl |
| Taq DNA polymerázab(5U/μL) | 0,125 μl |
| Voda bez nukleázy | Až 25 μl |
Poznámky:
1) a.
| DNA | Množství |
| Genomický | 1 ng-1 μg |
| Plazmidové nebo virové | 1 pg-1 ng |
2) b.Optimální koncentrace Taq DNA polymerázy se může ve specializovaných aplikacích pohybovat v rozmezí 5-50 jednotek/ml (0,1-0,5 jednotek/25 µl reakce).
Protokol tepelného cyklování
PCR
| Krok | Teplota(°C) | Čas | Cykly |
| Počáteční denaturacea | 95 ℃ | 1-3 min | - |
| Denaturace | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 cyklů |
| Žíháníb | 45-68 ℃ | 15-60 s | |
| Rozšíření | 68 ℃ | 1 kb/min | |
| Konečné prodloužení | 68 ℃ | 5 minut | - |
Poznámky:
1) Počáteční denaturace 1 min při 95 °C je dostatečná pro většinu amplifikací.U obtížných šablon se doporučuje delší denaturace 2-3 minuty při 95°C.Při PCR kolonií se doporučuje počáteční 5minutová denaturace při 95 °C.
2) Krok žíhání je typicky 15-60 s.Teplota žíhání je založena na Tm páru primerů a je typicky 45-68 °C.
