Rnase A
Ribonukleáza A (RNázaA) je jednovláknový polypeptid obsahující 4 disulfidové vazby s molekulovou hmotností přibližně 13,7 kDa.RNáza A je endoribonukleáza, která specificky degraduje jednovláknovou RNA na zbytcích C a U.Konkrétně štěpení rozpoznává fosfodiesterovou vazbu vytvořenou 5'-ribózou nukleotidu a fosfátovou skupinou na 3'-ribóze sousedního pyrimidinového nukleotidu, takže 2,3'-cyklické fosfáty jsou hydrolyzovány na odpovídající 3 nukleosid fosfáty (např. pG-pG-pC-pA-pG je štěpen RNázou A za vzniku pG-pG-pCp a A-PG).RNáza A je nejaktivnější při štěpení jednovláknové RNA.Doporučená pracovní koncentrace je 1-100 μG/ml, kompatibilní s různými reakčními systémy.Nízká koncentrace soli (0-100 mM NaCl) může být použita ke štěpení řetězců jednořetězcové RNA, dvouřetězcové RNA a RNA vytvořených hybridizací RNA-DNA.
Při vysoké koncentraci soli (≥0,3 M) však RNáza A specificky štěpí pouze jednovláknovou RNA.
RNáza A se nejčastěji používá k odstranění RNA během přípravy plazmidové DNA nebo genomové DNA.Zda je DNáza během procesu přípravy aktivní nebo ne, může snadno ovlivnit reakci.K inaktivaci aktivity DNázy lze použít tradiční metodu varu ve vodní lázni.Tento produkt neobsahuje DNázu a proteázu a před použitím nevyžaduje tepelné ošetření.Kromě toho může být tento produkt také použit v experimentech molekulární biologie, jako je analýza ochrany RNázy a analýza sekvence RNA.
Podmínky skladování
Výrobek by měl být skladován při teplotě -25℃~-15℃ po dobu 2 let.
Specifikace
| Vzhled | Prášek |
| Množství | 100 mg / 1 g |
| Typ produktu | RNáza A |
Instrukce
Toto je jedna z běžných metod přípravy skladovacího roztoku RNázy A.Dá se také připravitjinými metodami podle tradičních metod v laboratoři nebo v referenční literatuře (napřpřímo rozpouštějící v 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 nebo roztoku Tris-NaCl)
1. Použijte 10 mM octan sodný (pH 5,2) k přípravě 10 mg/ml zásobního roztoku RNázy A.
2. Zahřívání na 100 ℃ po dobu 15 min.
3. Ochlaďte na pokojovou teplotu, přidejte 1/10 objemu 1 M Tris-HCl (pH 7,4), upravte jeho pH na 7,4 (pronapříklad přidejte 500 ml 10 mg/ml skladovacího roztoku RNázy 1 M Tris-HCl, pH 7,4).
4. Zabalené při teplotě -20 ℃ pro zmrazené skladování, které může být stabilní až 2 roky.
[Poznámky]:
Když se roztok RNázyA vaří za neutrálních podmínek, vytvoří se vysrážení RNázy;Vařte ji při nižším pH, a pokud dojde k vysrážení, lze ji pozorovat, což může být způsobeno přítomností proteinových nečistot.Pokud se po varu objeví sediment, nečistoty mohou být odstraněny vysokorychlostním odstředěním (13 000 ot./min) a poté zabaleny pro zmrazení.
Poznámky
Používejte prosím nezbytné OOP, jako je laboratorní plášť a rukavice, abyste zajistili své zdraví a bezpečnost.
