Divoká Taq DNA polymeráza
Taq DNA Polymerase je termostabilní DNA polymeráza z Thermus aquaticus YT-1, která má 5′→3′ polymerázovou aktivitu a 5' klapkovou endonukleázovou aktivitu.
Komponenty
| Komponent | HC1010A-01 | HC1010A-02 | HC1010A-03 | HC1010A-04 |
| 10× Taq Buffer | 2×1 ml | 2×10 ml | 2×50 ml | 5×200 ml |
| Taq DNA polymeráza (5 U/μL) | 0,1 ml | 1 ml | 5 ml | 5×10 ml |
Skladovací stav
Přepravujte při teplotě 0°C a skladujte při -25°C~-15°C.
Definice jednotky
Jedna jednotka je definována jako množství enzymu, které inkorporuje 15 nmol dNTP do materiálu nerozpustného v kyselině za 30 minut při 75 °C.
Kontrola kvality
1.Test proteinové čistoty (SDS-PAGE):Čistota Taq DNA polymerázy byla > 95 %, stanoveno analýzou SDS-PAGE.
2.Endnukleázová aktivita:Minimálně 5 U Taq DNA polymerázy s 1 μg λDNA po dobu 16 hodin při 37 °C nevede k žádné detekovatelné degradaci, jak bylo stanoveno.
3.Exonukleázová aktivita:Minimálně 5 U Taq DNA polymerázy s 1 μg λ-Hind Ⅲ štěpené DNA po dobu 16 hodin při 37 °C nevede k žádné detekovatelné degradaci, jak bylo stanoveno.
4.Aktivita Nickase:Minimálně 5 U Taq DNA polymerázy s 1 μg pBR322 DNA po dobu 16 hodin při 37 °C nevede k žádné detekovatelné degradaci, jak bylo stanoveno.
5.Aktivita RNázy:Minimálně 5 U Taq DNA polymerázy s 1,6 μg MS2 RNA po dobu 16 hodin při 37 °C nevede k žádné detekovatelné degradaci, jak bylo stanoveno.
6.E-coliDNA:5 U Taq DNA polymerázy se testuje na přítomnost genomové DNA E. coli pomocí TaqMan qPCR s primery specifickými pro lokus rRNA E. coli 16S.Kontaminace genomové DNA E. coli je ≤1 kopie.
7.PCR amplifikace (5,0 kb Lambda DNA)- 50 µl reakce obsahující 5 ng Lambda DNA s 5 jednotkami Taq DNA polymerázy pro 25 cyklů amplifikace PCR vede k očekávanému 5,0 kb produktu.
Nastavení reakce
| Komponenty | Hlasitost |
| DNA šablonya | volitelný |
| 10 μM Forward Primer | 1 μl |
| 10 μM Reverse Primer | 1 μl |
| dNTP Mix (10 mM každý) | 1 μl |
| 10×Taq Buffer | 5 μl |
| Taq DNA polymerázab | 0,25 μl |
| Voda bez nukleázy | Až 50 μl |
Poznámky:
1) Optimální reakční koncentrace různých templátů je různá.Následující tabulka ukazuje doporučené použití templátu pro 50 µL reakčního systému.
| DNA | Množství |
| Genomický | 1 ng-1 μg |
| Plazmidové nebo virové | 1 pg-1 ng |
2) Optimální koncentrace Taq DNA polymerázy se může ve specializovaných aplikacích pohybovat od 0,25 µL~1 µL.
ReakceProgram
| Krok | Teplota(°C) | Čas | Cykly |
| Počáteční denaturacea | 95 ℃ | 5 minut | - |
| Denaturace | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 cyklů |
| Žíháníb | 60 ℃ | 15 s | |
| Rozšíření | 72 ℃ | 1 kb/min | |
| Konečné prodloužení | 72 ℃ | 5 minut | - |
Poznámky:
1) Počáteční denaturační podmínky jsou vhodné pro většinu amplifikačních reakcí a lze je upravit podle složitosti struktury templátu.Pokud je struktura šablony složitá, lze předdenaturační čas prodloužit na 5 – 10 minut, aby se zlepšil počáteční denaturační efekt.
2) Teplotu žíhání je třeba upravit podle hodnoty Tm primeru, která je obecně nastavena o 3~5 ℃ nižší než hodnota Tm primeru;U složitých šablon je nutné upravit teplotu žíhání a prodloužit dobu extenze, aby bylo dosaženo účinného zesílení.
